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      Vigorous Biotechnology

      威格拉斯生物技術

      (北京)有限公司

      新試劑 新技術 高質量 低價格

      DNA片斷純化技術概述

      反轉錄(reverse transcription, RT)是分子生物學中廣泛應用的一個技術。RNA依賴的DNA聚合酶(反轉錄酶)可以用RNA為模板,合成互補的DNA鏈,稱為反轉錄。獲得的cDNA可應用于擴增、克隆、表達等重要工作中。

      反轉錄病毒是自然界存在廣泛的病毒類型,含有不同特性的反轉錄酶。其中以禽源性病毒AMV和鼠源性病毒MMLV的反轉錄酶在實驗研究中使用最廣泛。各種原型反轉錄酶除具有RNA依賴的DNA聚合酶活性外,還具有RNase H活性,該活性能夠降解合成的cDNA與RNA雜鏈中的RNA鏈,對于cDNA合成有不良影響。AMV反轉錄酶具有反轉錄效率高、耐熱度高的優點,但其RNase H活性很高,導致cDNA合成片斷短的缺點。MMLV反轉錄酶反轉錄效率較低、耐熱度低,其RNase H活性也較低,適合應用于長片斷cDNA的合成。經人工改造的一些MMLV,可以進一步去除其RNase H活性,產生更好的反轉錄結果。

      反轉錄過程中,隨機的外源性RNase,即使是極微量,也可能導致反轉錄效率的降低甚至失敗。在反轉錄體系中加入RNase抑制劑常常是保證反轉錄體系正常工作的重要環節。蛋白性的RNase抑制劑是其首選。

      本公司生產的MMLV反轉錄酶,和蛋白性的RNase抑制劑,為實驗室反轉錄工作提供幫助。

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